打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点,因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行:载体用 BamHI切割以后,立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸;接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA连接酶后进行温育,连接之后,将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后,将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因,所以,转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照: 对照1: 将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照2: 将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照3: 将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上; 对照4: 将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用 DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果,在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表 2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表 2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表 2)。从实验平板上挑出 12 个菌落,分离了质粒 DNA,并用 BamHI进行切割,其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA 片段,实验终于获得成功。 你如何看待第一次的实验结果?对照 1 的目的是什么?
-
在Alcatel BSS O&M概念中,SBL是最基本但是最重要的单元,SBL被Disable后,其状态是:()AA、ITBB、SOSCC、OPRDD、FOS
-
打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体,以便在 E.coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点,因此计划将它从 BamHI...
-
3、输油泵作用是燃油箱内将柴油吸出并将柴油压力提高到()aMP。
输油泵作用是燃油箱内将柴油吸出并将柴油压力提高到()aMP。A0.1~0.12B0.15~0.3C0.35~0.4D0.5~0.55
-
4、TRU的容量是120amp,当只有一个TRU工作时:()
TRU的容量是120amp,当只有一个TRU工作时:()A不能满足飞机上所有的直流负载,不能放行飞机B可以满足飞机上所有的直流负载,可以放行飞机C可以满足飞机上所有的直流负载,但不...
-
5、在Windows 中,将某个选定的文件复制到另一个文件夹中,在"编
在Windows中,将某个选定的文件复制到另一个文件夹中,在"编辑"菜单中可选择的命令是()。A删除、粘贴B剪切、粘贴C复制、粘贴D选择性粘贴
-
下列各项中,不属于工业企业R&D成果应用活动的是( )。A工装模具设计B新产品原型设计C小批量试制D工业性试验